HaCaT人永生化表皮細胞

細胞株名稱： Hacat人永生化表皮細胞

種屬：人

組織來源：皮膚

生長特性：貼壁生長

形態特征：上皮細胞樣

培養條件：

完全培養基： DMEM（內含2mM L-glutamine）+10%進口胎牛血清。

培養條件：37℃   carbon dioxide(CO₂),5%

傳代方法：

收到細胞后，取出培養瓶在顯微鏡下觀察細胞生長情況。                    （一）如果細胞未超過80%匯合度時，用75%酒精噴灑整個瓶身消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，吸出培養液，僅留下10ml培養液在瓶內繼續培養。
(二)如果細胞已超過80%匯合度時，可根據情況進行傳代培養。具體步驟如下：
1. 棄去培養液，用PBS（不含鈣，鎂離子）潤洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置37℃培養箱中1-3分鐘預熱，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓分散，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清，補加1-2ml培養液后吹勻。                                                     4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含5ml培養基的新皿中或者培養瓶中。                                                                    5. 2-3天換液一次。
注意：收到細胞后將細胞放入37度培養箱中預溫1-2小時后再做處理，以穩定細胞狀態。傳代后細胞應該用新鮮的培養液，原瓶的培養液不能再使用。在運輸過程中可能會導致一些貼壁不牢的細胞發生部分脫落，可離心吹打后重新種入瓶中培養。

（收到細胞后3天內發現細胞異常請及時拍照并聯系）

凍存方法：

  凍存液：90%完全培養液，10%DMSO

  儲存：液氮儲存